CROMATOGRAFÍA

                    

 TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

1.  CROMATOGRAFÍA PLANA: La fase estacionaria se coloca sobre un soporte plano, en este el flujo de fase móvil se consigue por capilaridad o por capilaridad y gravedad. Solo pueden emplearse líquidos como fases móviles.

 Las principales técnicas son:

•   CROMATOGRAFÍA EN PAPEL: Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta técnica la fase estacionaria está constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego el disolvente o mezcla de disolventes empleada como fase móvil (eluente o eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un recipiente que la contiene (cámara de desarrollo). Después de unos minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel, se retira el papel y seca.

• CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: La técnica es similar a la cromatografía en papel, a excepción que en este caso el análisis se realizará en una placa de plástico, aluminio o vidrio cubierta de una capa de sustancia absorbente como alúmina o gel de sílice. A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.  

 2.  CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA: La fase estacionaria la forma un sólido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrio. La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solución que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por una nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. 

• CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO: Se trata de una cromatografía en columna que utiliza una fase estacionaria con sustancias con componentes con carga eléctrica. Se utiliza para separar compuestos cargados, incluyendo aminoácidos, péptidos y proteínas. La fase estacionaria es normalmente una resina de intercambio iónico que contiene grupos funcionales cargados que interaccionan con grupos cargados de signo opuesto del compuesto que se quiere retener. Puede ser: 
• - Intercambiador de iones cargado positivamente (intercambiador de aniones), que interacciona con aniones. 
• - Intercambiador de iones cargado negativamente (intercambiador de cationes), que interacciona con cationes. 

• CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN: La fase estacionaria es un material poroso, que retine a las moléculas en función de su tamaño. En ocasiones se denomina también cromatografía sobre geles o de permeabilidad en geles (GPC). Las muestras de mayor tamaño migran a los largo de la columna con mayor velocidad que las de tamaño pequeño. Las muestras de menor tamaño, entran en los poros y se mueven a lo largo de la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se encuentran en el interior de las bolas de polímero en su marcha a lo largo de la columna. 

 3.  CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD: La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna. Después de que las proteínas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna, la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína.