ESPECTOFOTOMETRÍA

ESPECTOFOTOMETRÍA
GLOSARIO RELACIONADO CON EL TEMA:

•   ESPECTROCOPIA: Es un método instrumental ampliamente utilizado por los físicos y químicos para poder determinar la composición cualitativa y cuantitativa de una muestra, mediante la utilización de patrones o espectros conocidos de otras muestras.
  
• FOTONES: El nombre moderno de fotón proviene de la palabra griega que significa luz. El fotón es una partícula portadora de todas las formas de radiaciones electromagnéticas, incluyendo los rayos gama, rayos X, luz UV, luz infrarroja, las microondas y ondas de rayos, el fotón tiene una masa invariante cero y viaja en el vacío con una velocidad constante.
  
•   FRECUENCIA: La frecuencia indica las veces en que sucede un hecho en un determinado periodo de tiempo. 

•  FRECUENCIA AM: La modulación de amplitud (AM) es una técnica utilizada en la comunicación electrónica, más comúnmente para la transmisión de información a través de una onda transversal de televisión.
• FRECUENCIA FM: La modulación de frecuencia o frecuencia modulada (FM) es una técnica de modulación que permite transmitir información a través de una onda portadora variando su frecuencia, en contraste con las ondas de AM en la que lo que varía es la amplitud y la frecuencia se mantiene constante.
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• LONGITUDES DE ONDA: La longitud de onda es la distancia que hay entre dos crestas o valles, ésta es inversamente proporcional a la frecuencia de la onda. Una longitud de onda larga corresponde a una frecuencia baja, mientras que una longitud de onda corta corresponde una frecuencia alta.

• LUZ: Es la parte de la radiación electromagnética que puede ser percibida por el ojo humano, gracias a ella podemos ver todo aquello que hay a nuestro alrededor. Hay cuerpos que producen y emiten su propia luz como el sol, el fuego, etc.
  
• RAYOS INFRARROJO: La radiación infrarroja o radiación IR es un tipo de radiación electromagnética y térmica de mayor longitud de onda que la luz visible. Los infrarrojos se clasifican de acuerdo a su longitud de onda: Infrarrojo cercano, medio y lejano. 
  
•   RAYOS ULTRAVIOLETA: Se denomina rayo ultravioleta o radiación UV a la radiación electromagnética, cuya longitud de onda está comprometida aproximadamente entre los 400nm y los 15nm.
•  RAYOS GAMMA: Radiación gamma o rayos gamma es un tipo de radiación electromagnética, está formada por fotones, producida generalmente por elementos radiactivos o procesos subatómicos.
• RAYOS X: La denominación rayos X designa a una radiación electromagnética, invisible para el ojo humano, capaz de atravesar cuerpos opacos y de imprimir las películas fotográficas.
  
•  SATURACIÓN: Es la intensidad de un matiz específico. Se basa en la pureza del color; un color muy saturado tiene un color vivo e intenso, mientras que un color menos saturado parece más descolorido y gris. Sin saturación, un color se convierte en un tono de gris. La saturación de un color está determinada por una combinación de su intensidad luminosa y la distribución de sus diferentes longitudes de onda en el espectro de colores.
  
• TONO: Es una de las propiedades o cualidades fundamentales en la propiedad de un color, definido técnicamente (en el modelo CIECAM02), como el grado en el cual un estímulo puede ser descrito como similar o diferente de los estímulos como rojo, amarillo y azul.
  
•   VELOCIDAD: Es una magnitud física de carácter vectorial que expresa el desplazamiento de un objeto por unidad de tiempo.

CROMATOGRAFÍA

                    

 TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

1.  CROMATOGRAFÍA PLANA: La fase estacionaria se coloca sobre un soporte plano, en este el flujo de fase móvil se consigue por capilaridad o por capilaridad y gravedad. Solo pueden emplearse líquidos como fases móviles.

 Las principales técnicas son:

•   CROMATOGRAFÍA EN PAPEL: Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta técnica la fase estacionaria está constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego el disolvente o mezcla de disolventes empleada como fase móvil (eluente o eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un recipiente que la contiene (cámara de desarrollo). Después de unos minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel, se retira el papel y seca.

• CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: La técnica es similar a la cromatografía en papel, a excepción que en este caso el análisis se realizará en una placa de plástico, aluminio o vidrio cubierta de una capa de sustancia absorbente como alúmina o gel de sílice. A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.  

 2.  CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA: La fase estacionaria la forma un sólido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o vidrio. La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solución que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por una nueva solución que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. 

• CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO: Se trata de una cromatografía en columna que utiliza una fase estacionaria con sustancias con componentes con carga eléctrica. Se utiliza para separar compuestos cargados, incluyendo aminoácidos, péptidos y proteínas. La fase estacionaria es normalmente una resina de intercambio iónico que contiene grupos funcionales cargados que interaccionan con grupos cargados de signo opuesto del compuesto que se quiere retener. Puede ser: 
• - Intercambiador de iones cargado positivamente (intercambiador de aniones), que interacciona con aniones. 
• - Intercambiador de iones cargado negativamente (intercambiador de cationes), que interacciona con cationes. 

• CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN: La fase estacionaria es un material poroso, que retine a las moléculas en función de su tamaño. En ocasiones se denomina también cromatografía sobre geles o de permeabilidad en geles (GPC). Las muestras de mayor tamaño migran a los largo de la columna con mayor velocidad que las de tamaño pequeño. Las muestras de menor tamaño, entran en los poros y se mueven a lo largo de la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se encuentran en el interior de las bolas de polímero en su marcha a lo largo de la columna. 

 3.  CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD: La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna. Después de que las proteínas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna, la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína.

POTENCIÓMETRO

POTENCIÓMETRO

El “pH” de una sustancia refleja su grado de acidez o de basicidad. La escala de pH se numera de cero a 14. El valor de pH indica si una solución es ácida (pH por debajo de 7), neutra (pH=7) o básica (pH por encima de 7).

Los potenciómetros o pH metros, son instrumentos eléctricos que se utilizan para medir el pH de una disolución, por estar diseñados para determinar las concentraciones de iones hidronios que posea, lo que permite conocer con precisión su grado de acidez o basicidad.

Se utiliza para determinar la acidez o alcalinidad que posee cada sustancia. Este equipo usa electrodo para medir el “pH exacto” de una solución. Potenciómetro mide dos variables: “pH” y temperatura. El Electrodo no se ve afectado por gases disueltos, agentes oxidantes o reductores, materia orgánica, etc.

La determinación de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a través de una fina membrana de vidrio que separa dos soluciones con diferente concentración de protones. En consecuencia se conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio delante el pH.

¿CÓMO FUNCIONA?

•    Los electrodos tiene una punta en forma de bola que tiene pequeños poros por los cuales son  sensibles los átomos de hidrógeno que se encuentran disueltos en la sustancia que queremos analizar.

• El electrodo de vidrio es relativamente inmune a las interferencias del color, turbidez, material coloidal, cloro libre, oxidante y reductor.

• La medida se afecta cuando la superficie de la membrana de vidrio está sucia con grasa o material orgánico insoluble en agua.

• Los electrodos tienen que ser enjuagados con agua destilada entre muestras. No se tienen que secar con un trapo, porque se podrían cargar electrostáticamente.

•   Luego se deben colocar suavemente sobre un papel, sin pelusa, para quitar el exceso de agua.

•   Como los electrodos de vidrio de pH mesuran la concentración de H+ relativa a sus referencias, tienen que ser calibrados periódicamente para asegurar la precisión. Por eso se utilizan los buffers de calibraje.

TÉCNICAS DE USO

1.    Se procederá a medir el pH una vez calibrado el aparato.

2. Llenar un vaso de precipitado con la muestra de agua hasta la marca de 50 ml. (aproximadamente).

3.    Pulsar el botón ON/OFF para encender el aparato.

4.    Sumergir el electrodo unos 2 cm en el vaso y mover suavemente.

5.    Esperar a que la lectura del pH se estabilice.

6. Una vez estabilizada la lectura que aparece en la pantalla del aparato, podemos mantener la lectura en la pantalla apretando el botón HOLD/CON.

7.    Anotar el valor que aparece en pantalla.

8.    Para volver a realizar otra medición, pulsar otra vez HOLD/CON.

9.    Lavar el electrodo con el frasco lavador, vertiendo el agua del lavado en un cristalizador.

10. Secar con un pañuelo de papel cuidadosamente.

11. Volver a realizar una nueva medida repitiendo los pasos desde el 4 al 10.