El método ELISA, se basa en el uso de antígenos Ags o anticuerpos Acs marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática.
Al estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o pocillo (inmunoadsorbente) la reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar, la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.
- ANTÍGENO (Ag): Molécula exógena, que se encuentra en la superficie de un agente patógeno, y que al entrar en contacto con el organismo, induce la producción de una respuesta del Sistema Inmune específica (formación de Acs).
- ANTICUERPO (Ac): Proteína producida como respuesta a una sustancia “extraña” (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse con él (complejo Ag-Ac).
Existen varios tipos de Elisa:
- ELISA no competitivo: Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo Ag-Ac, y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color.
- Directo: Detectan Ag
- Indirecto: Detectan Ac
- ELISA Sandwich - Doble (DAS) - Heterólogo (HADAS).
. 2. ELISA
competitivo: El Ac de la
muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de
unión del Ag.
Habrá
ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no
encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra.
El Elisa directo consta de unas etapas las cuales son las siguientes:
- Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos.
- Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados.
- Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.
- Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado.
- Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.
- Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
- Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos.
- Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados.
- Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.
- Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado.
- Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.
- Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
Una
de las grandes ventajas de la técnica ELISA es la posible
automatización de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha
automatización se
puede
conseguir con un simple colorímetro
o espectrofotómetro
de cubeta o con sofisticados equipos de lectura automática de microplacas.
Los
resultados
finales de la lectura colorimétrica se reflejan numéricamente mediante valores
de absorbancia o densidad óptica que se obtendrán
a
la longitud
de onda más
adecuada para la coloración final alcanzada.
Según sus aplicaciones clínicas se presenta en las siguientes enfermedades:
1. Enfermedades
producidas por parásitos
Toxoplasmosis, Triquinosis,
Tripanosomas.
2. 2. Enfermedades
producidas por Micoplasmas.
3. Enfermedades
producidas por bacterias
Mycobacterium
tuberculosis,
brucelas, Estreptococos, Salmonellas.
4. 4. Enfermedades
producidas por virus
Enfermedad de Newcastle, Peste
porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia felina.
Otras
aplicaciones
- Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona).
- Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)
- Inmunopatología (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmunocomplejos circulantes).
El
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